Bestemmelse av blodgrupper ved bruk av tsoliclones

Bestemmelse av blodgruppen med tsoliclones er en enkel prosedyre som utføres under laboratorieforhold. Den er basert på en kjemisk reaksjon mellom monoklonale sera og agglutinogener. Som et resultat kan du finne ut ikke bare blodgruppen, men også Rh-faktoren, og disse teknikkene regnes som de mest enkle, nøyaktige og rimelige. Stoffer selges i praktiske flasker i forskjellige størrelser og er utstyrt med en dråpedispenser. Analyser tar minutter, slik at laboratorier kan behandle et stort antall prøver gjennom dagen.

Hva er tsoliclones?

Zolicones er monoklonale antistoffer som finnes i saltvann. Stoffet fikk navnet sitt til ære for oppfinnerne - Central Order of Lenin Institute, i dag omdøpt til Hematology Research Center. De representeres av en væske som selges i 5 og 10 ml flasker. Dette er et universelt reagens for hematologiske studier, siden det lar deg bestemme blodgruppen både i AB0-systemet og i Rh-systemet..

Det er 3 hovedtyper av tsoliclones:

  • anti-A - rød væske;
  • anti-B - blå substans;
  • anti-D - gjennomsiktig reagens for bestemmelse av Rh-faktoren.

Anti-A og anti-B tsoliclones brukes til å bestemme blodgruppen. De går inn i biokjemiske reaksjoner med agglutinogener, som ligger på overflaten av erytrocytter - røde blodlegemer. Erytrocytter i blodgruppe A inneholder agglutinogen A, som vil reagere med anti-A-tsoliclon. Innholdet av agglutingen B. bestemmes på lignende måte. Et positivt resultat av reaksjonen er vedheft av erytrocytter og deres utfelling.

Prosedyre for blodtyping

Fremgangsmåten for å bestemme blodgruppen ved hjelp av tsoliclones er veldig enkel og utføres på få minutter. Det vil kreve nativt ("levende") kapillærblod, tilstedeværelsen av et konserveringsmiddel i det er tillatt. Du trenger også en tablett - en flat glassflate som reaksjonen vil finne sted på. Prosedyren utføres i henhold til en bestemt algoritme:

  1. påfør to store dråper zoliclones på overflaten av platen (vanligvis er anti-A-reagens til venstre og anti-B til høyre);
  2. tilsett små dråper blod, som vil være 10 ganger mindre i volum enn reagenser;
  3. Flytt tabletten forsiktig slik at blodet blandes med løsningen, men de to dråpene kombineres ikke med hverandre.
  4. observer resultatene om noen få minutter.

For å etablere gruppen er blod også tilsatt et konserveringsmiddel egnet. Imidlertid tillater enkelheten med teknikken at den kan utføres på stedet umiddelbart etter at det biologiske materialet er tatt. Det er nok å trekke en liten mengde kapillærblod fra en finger, slik at det er fullt tilstrekkelig for analyse.

Dekoding av resultatene

Resultatene kan observeres noen minutter etter at reagensene er kombinert. Fullstendig blanding av væsker indikerer fravær av en reaksjon, og agglutinering manifesteres ved utseendet av røde blodpropper i en klar løsning. Dette er røde blodlegemer som henger sammen når de kommer i kontakt med inkompatible monoklonale antistoffer. Deretter kan du tyde resultatene ved hjelp av en enkel algoritme:

  • Gruppe 1 (0) - agglutinasjon er fraværende i begge dråpene, siden det ikke er agglutinogener på erytrocytter;
  • Gruppe 2 (A) - reaksjonen blir observert i den første dråpen med anti-A tsoliclon;
  • Gruppe 3 (B) - i den andre dråpen holder erytrocytter sammen ved kontakt med anti-B-reagenset;
  • Gruppe 4 (AB) - utseendet til et rødt bunnfall i begge dråpene.

Den fjerde blodgruppen betraktes som den sjeldneste, derfor blir analysen gjentatt når agglutinering vises i begge hullene. I tillegg må blod tilsettes til normal saltvann for å eliminere muligheten for farlige sykdommer. Hos en sunn person vil den ikke reagere på noen måte med saltvann, og erytrocytter vil ikke holde seg sammen.

Bestemmelse av Rh-faktoren

For å bestemme Rh-faktoren trenger du en anti-D-tsoliclon. Den er en fargeløs væske og selges også i små flasker med dispenser. For å gjennomføre reaksjonen er det nok en dråpe blod som er plassert separat på platen. Prosedyren utføres i henhold til følgende skjema:

  1. påfør en 0,1 ml dråpe anti-D tsoliklon på glasset;
  2. ved siden av å tilsette en dråpe blod, hvis volum er 0,01 ml;
  3. kombiner de to væskene med en glassstang og rør forsiktig glasset slik at blodet blandes med reagenset;
  4. fikse resultatet etter 3 minutter.

De første resultatene kan sees på 15 sekunder, men det er viktig å vente i 3 minutter for å etablere det endelige resultatet. Tilstedeværelsen av et resultat, det vil si utseendet til en agglutinasjonsreaksjon, indikerer at Rh-faktoren er positiv, dens fravær indikerer en negativ Rh.

Nyttige tips

Bestemmelse av blodgruppen og Rh-faktoren ved bruk av tsoliclones regnes som en av de enkleste og mest tilgjengelige metodene, derfor brukes den mye i laboratorier på forskjellige nivåer. Videre gir denne analysen pålitelige resultater. I noen tilfeller er de imidlertid falske, og årsaken til dette er manglende overholdelse av flere regler. Enkle instruksjoner for bruk av tsoliclones og arbeid med dem vil tillate deg å unngå å oppnå pålitelige resultater og behovet for å gjennomføre studien igjen:

  • oppbevar reagensene i kjøleskapet ved en temperatur på 2 til 8 grader, og bruk den åpnede flasken innen 30 dager;
  • studier utføres ved romtemperatur, og i et for varmt rom anbefales det å jevnlig kjøle ned glassoverflaten på tabletten;
  • merke forskjellige kolikloner på tabletten med en markør, siden fargen deres raskt forsvinner etter tilsetning av blod;
  • observer de riktige proporsjonene av reagenser: hvis det er for mye blod, vil erytrocyttagglutinasjonsreaksjonen være lite uttrykt;
  • ikke tillat blanding av væskedråper der forskjellige typer tsolkikloner allerede er tilstede - i dette tilfellet må reaksjonen gjentas;
  • angi det endelige resultatet ikke mindre enn 3 minutter etter reaksjonsstart.

Det er også viktig å følge rekkefølgen av handlinger under analysen. Så hvis glassoverflaten ikke er svinget, selv om det ikke er noen vedheftingsreaksjon, vil erytrocytter være plassert i randsonen av dråpen. Dette kan føre til feiltolkning av resultatene. Når du bestemmer blodgruppen, er det nødvendig å ta hensyn til de akutte og kroniske sykdommene som observeres hos pasienten. Med patologier i leveren og organene i det hematopoietiske systemet, så vel som sykdommer som fortsetter som sepsis, kan patagglutinasjon oppstå. Røde blodlegemer vil holde seg sammen selv om de kommer i kontakt med normal saltvann. I kontrast, i leukemi, vil ikke blodcellene svare på tilstedeværelsen av antistoffer, og agglutinasjon vil ikke forekomme..

Sykloner er viktige reagenser som brukes daglig i hematologilaboratorier. De lar deg raskt og nøyaktig bestemme blodgruppen og dens Rh uten tilleggsutstyr og spesielle ferdigheter. Det er imidlertid viktig å følge en enkel algoritme slik at analyseresultatene er virkelig pålitelige..

MedGlav.com

Medisinsk register over sykdommer

Blodgrupper. Bestemmelse av blodgruppe og Rh-faktor.

BLODGRUPPER.


Tallrike studier har vist at blodet kan inneholde forskjellige proteiner (agglutinogener og agglutininer), hvis kombinasjon (tilstedeværelse eller fravær) danner fire blodgrupper.
Hver gruppe får et symbol: 0 (I), A (II), B (III), AB (IV).
Det er fastslått at bare blod fra samme gruppe kan overføres. I unntakstilfeller, når det ikke er blod i en gruppe, og transfusjon er viktig, er transfusjon av blod fra andre grupper tillatt. Under disse forholdene kan blod i gruppe 0 (I) transfuseres til pasienter med hvilken som helst blodgruppe, og pasienter med AB (IV) blod kan transfuseres med donorblod i en hvilken som helst gruppe.

Derfor, før du starter en blodtransfusjon, er det nødvendig å nøyaktig etablere pasientens blodgruppe og den transfuserte blodgruppen..

Bestemmelse av blodgruppe.


For å bestemme blodgruppen brukes standard sera fra gruppe 0 (I), A (II), B (III), som er spesielt tilberedt i laboratoriene til blodtransfusjonsstasjoner.
På en hvit plate, i en avstand på 3-4 cm fra venstre til høyre, setter du tallene I, II, III, som betegner standard serum. En dråpe standard serum 0 (I) gruppe påføres med en pipette i sektoren av platen, indikert med tallet I; deretter påføres en dråpe serum A (II) gruppe under nummer II med den andre pipetten; ta også serum B (III) i gruppen og påfør under nummer III med en tredje pipette.

Deretter prikkes motivet med en finger, og det flytende blodet overføres med en glassstang til en dråpe serum på platen og blandes til den blir jevnt farget. En ny pinne overføres til hvert serum. Etter 5 minutter fra fargingstidspunktet (per time!) Bestemmes blodgruppen av endringen i blandingen. I serumet der agglutinasjon oppstår (liming av erytrocytter), er det tydelig synlige røde korn og klumper; i serum, der agglutinasjon ikke forekommer, vil bloddråpen forbli homogen, jevnt farget rosa.

Avhengig av blodgruppen til pasienten, vil agglutinasjon forekomme i visse prøver. Hvis pasienten har en 0 (I) blodgruppe, vil ikke liming av erytrocytter med noe serum forekomme.
Hvis pasienten har en A (II) blodgruppe, vil det ikke være agglutinasjon bare med serumet fra gruppe A (II), og hvis pasienten har en B (III) -gruppe, vil det ikke være noen agglutinasjon med serum B (III). Agglutinasjon observeres med alle sera, hvis blodet som er testet er en AB (IV) gruppe.

Rh-faktor.


Noen ganger, selv med blodtransfusjon i samme gruppe, observeres alvorlige reaksjoner. Studier har vist at omtrent 15% av mennesker mangler et spesielt protein i blodet, den såkalte Rh-faktoren..

Hvis disse menneskene får en annen blodtransfusjon som inneholder denne faktoren, oppstår en alvorlig komplikasjon kalt Rh-konflikt, og sjokk vil utvikle seg. For tiden er det derfor pålagt at alle pasienter bestemmer Rh-faktoren, siden bare Rh-negativt blod kan overføres til en mottaker med en negativ Rh-faktor..

En akselerert måte å bestemme Rh-tilknytning på. På et petriskål glass påføres 5 dråper anti-Rhesus serum i samme gruppe som mottakerens. En dråpe av pasientens blod tilsettes serumet og blandes grundig. Petriskålen plasseres i et vannbad ved 42-45 ° C. Reaksjonsresultatene blir evaluert etter 10 minutter. Hvis blodagglutinasjon oppstår, har pasienten Rh-positivt blod (Rh +); hvis det ikke er agglutinasjon, er det testede blodet Rh-negativt (Rh—).
En rekke andre metoder for å bestemme Rh-faktoren er utviklet, spesielt ved bruk av det universelle anti-Rh-reagenset D.

Det er obligatorisk å bestemme blodgruppen og Rh som tilhører alle pasientene på sykehuset. Resultatene av studien må føres inn i pasientens pass.

Bestemmelse av blodgruppealgoritme

Indikasjoner: behov for blodtransfusjon, forberedelse til kirurgi.

Forbered: standard plate med fordypninger; et sett med glassstenger; isotonisk natriumkloridoppløsning; et sett med hemagglutinerende sera 1, 2, 3, 4 grupper av to serier; pipetter; undersøkt blod tatt fra en vene eller finger; klokke; brett; hansker; beholdere for avfallsmateriale; beholdere med desinfeksjonsløsninger.

Forberedelse for manipulasjon:

  1. Sykepleieren er fullt forberedt på å utføre manipulasjonen: hun er kledd i dress (kappe), maske, hansker, hette, skiftbare sko.
  2. Sjekk kvaliteten på standard hemagglutinerende sera ved: fargemarkering, utseende (lys, gjennomsiktig); emballasjens sikkerhet, tilstedeværelsen av en korrekt utformet etikett.
  3. Forbered alt du trenger for å utføre manipulasjonen.

Utfører manipulasjon:

- på en hvit plate, i henhold til betegnelsen, påfør suksessivt en dråpe serum 1, 2, 3 grupper på to serier. Senk hver pipette umiddelbart i samme ampulle (hetteglass) som de ble tatt fra;

- bruk en glassstang, påfør en dråpe av testblodet ved siden av depresjonene (6 depresjoner). En dråpe blod bør være 10 ganger mindre enn en dråpe serum;

- merk tiden og bland blodet med serum 1 g med en ren, tørr glassstang, deretter 2 g med en annen stang. etc. i alle fordypninger;

- som begynnelsen av agglutinering, men ikke tidligere enn 3 minutter, tilsett en dråpe isoton natriumkloridoppløsning til de dråpene der agglutinasjonsreaksjonen skjedde for å utelukke falsk agglutinasjon og fortsette observasjonen i 5 minutter.

Evaluering av resultatene:

a) med en positiv reaksjon, vises de minste kornene som er synlige for øyet i blandingen, bestående av limte erytrocytter. Små korn smelter sammen til store korn, og noen ganger til flak, mens mysen blir misfarget;

b) i tilfelle en negativ reaksjon, forblir væsken jevnt farget rosa;

c) 4 kombinasjoner av positive og negative reaksjoner er mulige:

1. Hvis det ikke er agglutinasjon i noen av cellene, så er blodet i gruppe I (0).

2. Hvis agglutinasjon er i de første og tredje cellene, så er blodet i gruppe II (A).

3. Hvis agglutinering er i første og andre gruppe, så er blodet fra III (B) -gruppen.

4. Hvis agglutinasjon i de første, andre, tredje cellene, så blodet fra IV (AB) -gruppen.

For å eliminere feil, sjekk blod med serum fra gruppe 4, der agglutinering ikke skal være.

Slutt på manipulasjon:

  1. Fjern hanskene, legg dem i en desinfiserende løsning.
  2. Vask hendene, tørk med et håndkle.

Merk: Blodgruppebestemmelse utføres i et rom med god belysning ved en temperatur på 15 - 25 0 С.

algoritme 7 bestemmelse av blodgruppe med tsoliclones

Bestemmelse av blodgruppen med anti-A og anti-B tsoliclones

1 Innledning: Vi utfører blodgruppebestemmelse med tsoliclones i behandlingsrommet som foreskrevet av legen. Jeg har på meg hatt, briller, maske, kappe, forkle, hansker. Hender forbehandlet hygienisk.

2 Utstyr:

Tsoliklones anti-A, anti-B

Testblod (prøverør)

Blodtypeplate.

Sterile glassstenger 2 stk (i et glass, petriskål)

Isotonisk natriumkloridoppløsning

Steril pipette 1 stk.

Steril kapillær med pære.

Beholder med 3% kloraminoppløsning.

3 Teknikk for manipulasjon:

Tilsett tsoliclones i individuelle brønner en stor dråpe om gangen.

Innfør små (0,01 ml) bloddråper med kapillær ved siden av dråper tsoliclones, og unngå kontakt mellom kapillær og blod.

Bland tsoliklons og blod med separate pinner.

Rist på platen, observer agglutinasjon i 2,5 minutter.

Pipetter inn i brønnene der agglutinasjon har skjedd på den første dråpet saltvann

Wiggle, se agglutination.

Når du bestemmer blodgruppen ved hjelp av tsolikoner...

Ingen agglutinasjon blir observert i noen av brønnene - den første gruppen

Agglutinasjon er observert med anti-A tsoliclon - den andre gruppen

Agglutinasjon observeres med anti-B-tsoliclon - den tredje gruppen

Agglutinasjon er observert med anti-A og anti-B tsoliclones - den fjerde gruppen

Etter manipulasjon blir alle brukte gjenstander dynket i en beholder med en 3% kloraminoppløsning.

4 Mulige feil:

Ikke bruker helsearbeiderens verneutstyr.

Gjenbruk av pinner.

Overføring av pinner i kontakt med blod over skuffen med rene pinner.

Manglende overholdelse av agglutinasjonsbildet med konklusjonen om gruppetilhørighet.

Elementer som har kommet i kontakt med blod har ikke blitt desinfisert.

Ikke tabber:

Agglutinasjon ventetid mindre enn 2,5 min.

Ingen saltvann ble tilsatt til brønnene der agglutinasjon skjedde.

Å holde pinner i endene, ikke midt.

5 Evalueringskriterier:

Bestått - ingen grove feil, ikke mer enn to ikke-grove feil.

Ikke bestått - tilstedeværelsen av grove feil, tilstedeværelsen av mer enn to ikke-grove feil.

Hvis det gjøres en grov feil, kan læreren be deg om å gjenta den aktuelle fasen av manipulasjonen. Hvis feilen gjentas, gikk den ikke over. Ikke mer enn én repetisjon tillatt.

Bestemmelse av blodgruppe

I 1901 oppdaget den fremtredende forskeren Karl Landsteiner blodgrupper og la grunnlaget for moderne transfusiologi. Forskeren identifiserte tre grupper basert på forskjellige varianter av agglutinasjonsreaksjonen av erytrocytter og blodserum. Materialet for studien ble hentet fra ansatte i vårt eget laboratorium. Landsteiners studenter, Decastello og Sturley, oppdaget en fjerde gruppe noen år senere, men anså den tvilsom og ekskludert fra forskningsresultatene. I 1906 bekreftet en psykiater fra Praha Jan Janski eksistensen av AB (IV) -gruppen. Publikasjonen av studien i en lokal publikasjon gikk nesten ubemerket. I 1910, etter gjenoppdagelsen av Mosses fjerde gruppe, ble Jan Jansky tvunget til å bevise oppdagelsens overlegenhet. En tsjekkisk forsker foreslo en digital betegnelse på blodgrupper: I, II, III, IV.

I transfusjonsmedisin kalles forskjellige kombinasjoner av erytrocytantigener blodgrupper. Antigener er genetiske trekk: de arves fra foreldrene og forblir uendret gjennom hele livet. I 1980 utviklet International Blood Transfusion Community en numerisk terminologi for antigener av røde blodlegemer. Tildelt 23 blodgruppesystemer, inkludert 194 antigener. Nummereringen tilsvarer i de fleste tilfeller rekkefølgen på deteksjonen. Antigenene som inngår i hvert av de 23 systemene er kodet med et sekssifret tall: de tre første sifrene er systemnummeret, de resterende tre indikerer spesifikkheten til antigenet i systemet.

System nr.NavnBetegnelseNavn på generKromosomalisering
001AB0AB0AB09q34.1-q34.2
002MNSMNSGYPA, GYPB, GYPE4q28-q31
003PP1P122q11.2-qter
004RhRHRHD, RHCE1p36.2-p34
005LutherskLULU19q12-q13
006KellKELKEL7q33
007LewisLEFUT319p33
008DuffyFYFY1q22-q23
009KiddJKJK18q11-q12
010DiegoDIAE117q12-q21
011YtYTSMERTE7q22
012XgXGXGXp22.32
013SciannaSCSC1p36.2-p22
014DombrockGJØREGJØREukjent
015ColtonCOAQP17p14
016Landsteiner-WienerLWLW19p13.2-cen
017Chido / RogersCH / RGC4A, C4B6p21.3
018HhHFUT119q13
019KxXKXKXp21.1
020GerbichGEGYPC2q14-q21
021CromerCROMDAF1q32
022KnopperKNCR11q32
023IndiskICD4411p13

AB0 blodgruppesystem

Gruppetilhørighet i henhold til AB0-systemet

AgglutinogenerAgglutininer
0α og β
ENβ
Bα
ABNei
  • 0 (I): antigenene A og B er fraværende, antistoffer α og β påvises (35 - 40% av verdens befolkning);
  • A (II): antigen A og antistoffer β er til stede (35%);
  • B (III): Agglutinogen B og Agglutinin α ble funnet (15 - 20%);
  • AB (IV): tilstedeværelse av agglutinogener A og B, fravær av agglutininer α og β (5-10%).

Når vi beveger oss fra vest til øst for Eurasia, reduseres deteksjonshastigheten for antigen A, og antigen B øker. Antigen 0 er sjelden i Asia, men er utbredt blant urfolkene i Sør-Amerika, Polynesia og Australia. Årsaken er epidemier av smittsomme sykdommer.

Resultatet av blodtyping er registrert i medisinsk historie eller i giverkortet. Transfusjonslegen angir dato og tegn.

I noen tilfeller observeres en mild agglutinering av erytrocytter under typing. Den utilstrekkelig uttalte reaksjonen forklares med tilstedeværelsen av svake varianter av antigenene A og B. Den største kliniske betydningen presenteres av undergrupper A1 og A2. Svake varianter ble først oppdaget i 1911 av forskerne Dungern og Hirszeld. Senere i 1930 foreslo Landsteiner og Levine undergruppenavnene - A1 og A2. EN2 forekommer opptil 20% i gruppe A og opptil 35% i gruppe AB. Ansiktsserum fra blodprøver A2 kan inneholde anti-A1-antistoffer: i 2% av tilfellene i gruppe A.2 og 30% i A.2B. Anti-A-antistoffer1 er farlige på grunn av agglutinering av erytrocytter i gruppe A..

Metode for å bestemme blodgrupper A2 og A2B

Erytrocytt påvisningshastighet A2 varierer betydelig avhengig av reagensene som brukes. Her er en sammenligning av forskningsresultatene når du bruker forskjellige metoder for å bestemme blodgrupper A2 og A2B.

  • Anti-A1 (lektin, fytohemagglutinin). Diagnosticum tydelig (på +++ / ++++) agglutinerer A1 erytrocytter umiddelbart etter blanding med prøven. Agglutinerer ikke A2 eller forårsaker mindre agglutinasjon i femte minutt eller senere.
  • Standard isohemagglutinerende serum.
  • Anti-A og anti-AB sykloner.
  • Tsoliklon anti-A svak.
Prøver analysertBlodgruppe A (II)Blodgruppe AB (IV)
Prøver analysertGruppe A2 (II) i%Prøver analysertGruppe A2B (IV) i%
Anti-A1 (lektin, fytohemagglutinin)159214.735723.5
Sykloner: anti-A, anti-AB35992,1 *3577,03 *
Tsoliklon anti-A - svak35874,5 *35711,2 *
Standard isohemagglutinerende serum159217.434434.2

Merk: * - agglutinasjon er svak, det er små agglutinater på rosa bakgrunn.

Den høyeste forskningsnøyaktigheten er gitt av Anti-A1 (lektin, fytohemagglutinin). Testen anbefales for påvisning av antigen A-undergrupper hos barn under to år. Årsaken er fysiologisk umodenhet av erytrocytter hos nyfødte, noe som fører til feilaktige resultater av en studie med standard isohemagglutinerende sera.

I 1930 oppdaget Landsteiner og Levine undertypen Aint: en mellomvariant mellom A.1 og A2. Dette antigenet er karakteristisk for negroider og når 8,5% hos personer med blodgruppe A. Hos kaukasiere ble Aint observert hos bare 1% av personer med den andre blodgruppen. I ekstremt sjeldne tilfeller mangler en person alle antigener i AB0-systemet. Bombay-fenotypen skyldes hh-genotypen. I fravær av H-antigen finnes anti-A- og anti-B-antistoffer hos personer i denne kategorien.

Metode for å bestemme blodgrupper

Algoritme for å bestemme blodgruppen med hemagglutinerende sera

For å bestemme AB0-blodgruppen ved en direkte metode, brukes to serier med standard isohemagglutinerende sera. Forbered to batcher av sera i tre grupper med en titer på 1:32 eller høyere. Bruk en separat merket pipette for å tegne hvert serum. Forbered AB (IV) serum for kontroll.

  1. Sørg for god belysning og lufttemperatur 18 - 25 ° C.
  2. Merk platen: 0 (I) - venstre, A (II) - midt, B (III) - høyre. Øverst i midten angir du donorens navn eller antall blod som blir analysert.
  3. Påfør 1-2 dråper (ca. 0,1 ml) serum i brønner i to rader i henhold til platemerket.
  4. Plasser en liten dråpe erytrocytter som skal undersøkes ved siden av serumdråpene med en pipette eller en glassstang. Volumet av serumet bør være omtrent 10 ganger volumet av den erytrocytholdige væsken.
  5. Rør dråpene i brønnene med en pinne.
  6. Rist tabletten lett for å få raskere reaksjon.
  7. Etter tre minutter, tilsett en dråpe NaCl til brønnene i platen der agglutinering har begynt. Vent to minutter til.
  8. Evaluer reaksjonsresultatene i løpet av fem minutter etter fem minutter. I tilfelle mild agglutinasjon, tilsett en dråpe NaCl.
  • En negativ reaksjon i tre brønner indikerer fraværet av antigener på erytrocyttene i testprøven. Blod tilhører gruppe 0 (I).
  • Agglutinasjon i brønner med serum 0 (I) og B (III) indikerer tilstedeværelsen av agglutinogen A og tilhører gruppe A (II).
  • Utbruddet av en reaksjon med sera 0 (I) og A (II) indikerer tilstedeværelsen av antigen B og gruppe B (III).
  • Reaksjonsresultatene i alle brønner indikerer tilstedeværelsen av agglutinogener A og B og tilsvarer den fjerde gruppen AB (IV).

I sistnevnte tilfelle bør du sørge for at det ikke er noen uspesifikke reaksjoner: påfør 2-3 dråper av den tilsvarende serumgruppen AB (IV) på platen og tilsett en dråpe erytrocytter som skal analyseres. Rør om væskene og vurder resultatet etter fem minutter. Fraværet av agglutinasjon indikerer tilhørighet til AB (IV) -gruppen, tilstedeværelsen er et tegn på en uspesifikk reaksjon. I dette tilfellet, så vel som i tilfelle mild agglutinasjon, gjenta studien med andre serier.

Teknikk for å bestemme blodgruppen med tsoliclones

Monoklonale antistoffer mot erytrocytantigener har erstattet isohemagglutinerende sera. Én gruppe anti-A, anti-B, anti-AB reagenser er tilstrekkelig for hver typing. Innføringen av monoklonale reagenser har signifikant forenklet og standardisert metoden for å bestemme AB0-blodgruppen. Her er en rask trinnvis guide til å utføre forskning på et nettbrett.

  1. Gi god belysning. Arbeid ved romtemperatur.
  2. Forskningsobjektet er erytrocytholdige medier.
  3. Merkeplate brønner: anti-A, anti-B, anti-AB eller bruk en plate med merket klistremerke.
  4. Tilsett ca. 0,1 ml av det passende monoklonale reagenset i hver av de tre merkede brønnene.
  5. Tilsett ca. 0,03 ml analyserte erytrocytter ved siden av hver dråpe diagnosticum.
  6. Bland reagens med erytrocytter i brønner med separate individuelle glassstenger.
  7. Rist tabletten i omtrent tre minutter.
  8. Sjekk for agglutinasjon i brønnene.

Vanligvis oppdages en reaksjon allerede i de første sekundene etter blanding. Samtidig kan svake varianter av antigenene A og B gi en senere agglutinasjon.

Bestemmelse av blodgruppen ved den indirekte metoden: en handlingsalgoritme

Metoden for å bestemme blodgruppen er basert på interaksjonen mellom erytrocytter fra forhåndstypede individer i gruppe 0, A, B eller en blanding av erytrocytter fra flere enkeltgruppedonorer med isohemagglutininer α og β i det studerte serumet..

Bruk tørre, rene pipetter med hvert typeagens. Skyll omrøringspinner og pipetter i 0,9% NaCl-løsning.

  • Klargjør en tallerken eller plate. Gi god rombelysning.
  • Samle 3-5 ml blod uten stabilisator i et prøverør. La mysen sitte i 1,5 - 2 timer ved romtemperatur.
  • Vask test erytrocytter i 0,9% saltvann. Forbered en 5% slurry.
  • Merk delene på tabletten: 0 (I), A (II), B (III).
  • Plasser 2 dråper (ca. 0,1 ml) av det analyserte plasmaet i hver av de tre brønnene.
  • Tilsett ca. 0,03 ml testrøde blodlegemer i hver brønn.
  • Bruk separate pinner og bland typede røde blodlegemer med serum.
  • Rist tabletten forsiktig i 5 minutter.
  • Utfør en visuell vurdering av agglutinasjonstestresultatene i overført lys.

Konklusjon om gruppetilhørighet

Plasmaresultater med standard erytrocytterGruppetilhørighet
0 (I)A (II)B (III)
-++0 (I)
--+A (II)
-+-B (III)
---AB (IV)

+ - tilstedeværelse av agglutinasjon, - - negativt resultat av reaksjonen.

  • 0 (I): reaksjon i brønn A (II), B (III) (α- og β-antistoffer påvist).
  • A (II): agglutinasjon med erytrocytter B (III) (β-agglutininer påvist).
  • B (III): agglutinasjon i hull A (II) (α agglutininer bestemt).
  • AB (IV): ingen reaksjon resulterer i alle brønner (ingen antistoffer påvist i plasma).

Rhesus-systemet

Levine og Stetson oppdaget Rhesus-antigener i 1939. Forskere studerte årsakene til utviklingen av hemolytiske reaksjoner hos kvinner under fødsel under transfusjoner til kvinner identiske i AB0-, MN- og P.-systemene av erytrocytter fra ektemenn. Et år senere produserte Landsteiner og Wiener antistoffer ved å immunisere kaniner med erytrocytter fra rhesusaper. Antistoffene kalles anti-RH-antistoffer. De resulterende agglutininene inngikk en agglutinasjonsreaksjon med erytrocytter av rhesusaper og med erytrocytter på 85% av hvite New Yorkere. Antigenet som forårsaket dannelsen av antistoffer kalles RH-faktor (D-faktor).

I sjeldne tilfeller inneholder menneskelige røde blodlegemer ikke noe rhesusantigen. Fenotypen betegnes Rhnull. Gen Xro i dette tilfellet presenteres det i homozygot form og hemmer produksjonen av alle antigener. Rh fenotypenull viser ikke agglutinogen aktivitet, men har evnen til å overføre antigener ved arv.

Blant europeere er hyppigheten av Rh-positiv for D-antigenindivider 85%. Membranen til røde blodlegemer inneholder vanligvis rundt 10 000 - 30 000 D. molekyler. Det er to spesielle typer D-positive personer: D u (svak) og D delvis (delvis). Immunsystemet Du og D delvis er i stand til å produsere anti-D-antistoffer.

Svakt antigen forekommer hos 1,5% av Rh-positive individer og er preget av et lavt antall (100-500) D-molekyler på membranen. Det er immunogent for Rh-negative individer. I dette tilfellet kan transfusjon av D-positive erytrocytter hos pasienter med svak D forårsake sensibilisering av giverens blodceller. Erytrocytter med Du er svakt agglutinert eller inngår i det hele tatt ikke en direkte agglutinasjonsreaksjon med komplette anti-Rh-antistoffer. Bestemmelse av Rh-tilknytning utføres i en indirekte antiglobulintest. Bærere D u regnes som Rh-positive givere og Rh-negative mottakere.

Del D er mangelfull i en eller flere epitoper av proteinmolekylet. Immunsystemet til mennesker med D delvis er i stand til å produsere antistoffer mot de manglende epitopene. Syv grupper av personer skiller seg ut mellom bærere av et delvis antigen. Den største kliniske betydningen er transport av D VI (kun epitop Z er til stede): eierne av denne kategorien produserer antistoffer mot det uendrede antigenet og mot de delvise antigenene D I - D V, D VII. Teknikken for å bestemme Rh-faktor D VI består i sekvensiell bruk av to diagnoser: monoklonale IgM anti-D antistoffer (anti-D-Super eller Anti-D IgM tsoliklon) og anti-D polyklonale eller monoklonale IgG antistoffer (standard universalreagens eller anti-D-tsoliclon -D). Et negativt resultat av reaksjonen ved første og et positivt resultat i andre fase av studien indikerer påvisning av D VI. Vanligvis tilsvarer kategori D VI genotypen CcDee. Gravide kvinner med D VI når de bærer et foster med full D, foreskrives anti-rhesus immunglobulin.

Antistoffer mot Rhesus-antigener er immun. Oppstå på grunn av isosensibilisering. Spesifisiteten bestemmes av antigenene som provoserer dannelsen av antistoffer. Isoler komplette og ufullstendige antistoffer.

Komplett er IgM-antistoffer. De har høy molekylvekt og finnes sjeldnere enn ufullstendige antistoffer. Kunne agglutinere Rh-positive erytrocytter. Er mindre viktig for transfusjoner.

Ufullstendig tilhører overveiende IgG-klassen. De er festet på overflaten av Rh-positive erytrocytter uten dannelse av agglutinater. Binding av blodceller utføres i nærvær av kolloidale oppløsninger og proteolytiske enzymer eller etter behandling med antiglobulinserum. De har lavere molekylvekt sammenlignet med komplette antistoffer. Kunne krysse morkaken. Under sensibilisering produseres først komplette antistoffer, deretter produseres ufullstendige (IgG immunglobuliner) antistoffer i større grad.

Teknikk for å bestemme Rh-faktoren ved bruk av anti-D-Super tsoliklon

Tsoliklon Anti-D-Super er et komplett anti-D IgM humant antistoff. For å oppnå pålitelige resultater, må den analyserte prøven inneholde et tilstrekkelig antall røde blodlegemer..

  1. Gi god belysning og romtemperatur i rommet.
  2. Plasser en stor dråpe (ca. 0,1 ml) Anti-D IgM på platen.
  3. Plasser en liten dråpe (ca. 0,03 ml) av testrøde blodlegemer i nærheten.
  4. Bland to dråper med en steril pinne.
  5. Etter 10 - 15 sekunder, vipp platen forsiktig i 20 - 30 sekunder.
  6. Sjekk for agglutinasjon tre minutter etter blanding.

I tilfelle en reaksjon blir blodet vurdert som Rh-positivt (Rh +), i fravær av en reaksjon - som Rh-negativt (Rh-). Ved negativ eller svak agglutinasjon er det nødvendig å gjennomføre studien på nytt med ufullstendige anti-D IgG-antistoffer for å identifisere et svakt eller delvis antigen D.

Metode for å bestemme Rh-faktoren D u i en prøverørstest

Parallelt med analysen utføres tre kontrollprøver: tsoliklon Anti-D (anti-D IgG) reagens med standard Rh-positive og Rh-negative erytrocytter, analyserte erytrocytter med gelatinløsning uten anti-D IgG diagnosticum.

  1. Plasser i et prøverør 0,05 - 0,1 ml (en dråpe) erytrocytter fra en koagulert blodpropp eller vaskes fra et konserveringsmiddel.
  2. Tilsett 0,1 ml (to dråper) 10% gelatin oppvarmet til flytende ved 45 - 50 ° C..
  3. Tilsett en dråpe anti-D (anti-D IgG) tsoliclon.
  4. Blande.
  5. Inkuber røret i et vannbad i 10-15 minutter eller i en inkubator ved 48 ° C i en halv time.
  6. Tilsett 5-6 ml isoton løsning.
  7. Snu røret 1-2 ganger.
  8. Vurdere tilstedeværelsen av agglutinasjon i overført lys.

Mangelen på resultater av reaksjonen med anti-D IgM og uttalt agglutinasjon med anti-D IgG indikerer påvisning av svake former for antigen D. I tilfelle mild agglutinasjon, bør studien gjentas i den indirekte Coombs-testen.

Bestemmelse av Rh-tilknytning til et standard universalreagens

Standard reagens antiresus Rh0D inneholder polyklonale ufullstendige anti-D-antistoffer. Parallelt med analysen av prøven utføres en kontrollstudie av Rh-reagenset0D med standard Rh-positive (enkeltgruppe eller gruppe 0) og Rh-negative (enkeltgruppe) erytrocytter.

  1. Plasser en dråpe Rh diagnosticum på bunnen av røret0D.
  2. Tilsett en dråpe analyserte røde blodlegemer.
  3. Rist røret flere ganger.
  4. Vipp røret til nesten vannrett og vri sakte i minst 3 minutter. Å spre innholdet langs veggene vil gi et mer uttalt reaksjonsresultat. Vanligvis skjer agglutinasjon de første 60 sekundene. Det trengs tid for å oppdage et svakt antigen D u.
  5. Tilsett 2-3 ml isoton NaCl-oppløsning og vend røret 2-3 ganger uten å riste.
  6. Vurder visuelt tilstedeværelsen av agglutinasjon. Uttalte flak mot bakgrunnen av en klar løsning indikerer tilstedeværelsen av antigen D. En jevn farget væske indikerer fravær av antigen.

Resultatet betraktes som pålitelig bare etter kontroll av kontrollprøvene: utbruddet av en reaksjon med standard Rh-positiv og ingen reaksjon - med Rh-negative erytrocytter.

For informasjon om trinnvis formulering av den indirekte Coombs-testen ved bruk av ufullstendige anti-D-antistoffer, se delen "Coombs-reaksjon" på nettstedet.

For Mer Informasjon Om Diabetes